中药名称:霍山石斛
霍山石斛的名称:
霍山石斛
霍山石斛 本品为兰科植物霍山石斛Dendrobium buoshanense C.Z. Tang et S. J. Cheng的新鲜茎或干燥茎。11月至翌年3月采收，洗净，鲜用或干燥。
霍山石斛的出处:
安徽省中药饮片炮制规范（2019年版）
霍山石斛的所属植物:
霍山石斛
霍山石斛的图鉴:
霍山石斛的炮制
- 鲜霍山石斛：取霍山石斛，除去根须、叶及泥沙等杂质，洗净，晾干。
- 霍山石斛干条：取霍山石斛，除去杂质，加热去除叶鞘，洗净，干燥。
- 霍山石斛枫斗：取霍山石斛，除去杂质，加热去除叶鞘，洗净，边加热边扭成螺旋状或弹簧状，干燥。
霍山石斛的性状
- 鲜霍山石斛：本品呈类圆柱形或类圆锥形，从根基部向上迅速变粗后逐渐变细，长3～9cm，直径2～9mm表面淡黄绿色，有时可见淡紫红色斑点，光滑或有细纵纹，3～7节，节间长0.5～1.5cm，节上有时可见残留的灰白色膜质叶鞘；一端可见茎基部残留的短须根或须根痕。肉质，易折断，断面淡黄绿色或深绿色。气微，味淡，嚼之有黏性且少有渣。
- 霍山石斛干条：本品呈直条状或不规则弯曲形，长2～8cm,直径1～7mm。表面淡黄绿色或黄绿色，偶有黄褐色斑块，有细纵纹，节明显，节上有时可见残留的灰白色膜质叶鞘；一端可见茎基部残留的短须根或须根痕，另一端为茎尖，较细。质硬而脆，易折断，断面平坦，灰黄色至灰绿色，略角质状。气微，味淡，嚼之有黏性。
- 霍山石斛枫斗：本品呈螺旋形或弹簧状，通常为2～5个旋纹，茎拉直后长2～8cm，直径1～7mm。表面淡黄色至黄绿色，有细纵纹，节明显，节上有时可见残留的灰白色膜质叶鞘；一端可见茎基部残留的短须根或须根痕，另一端为茎尖，较细。质硬而脆，易折断，断面平坦。气微，味淡，嚼之有黏性。
霍山石斛的鉴别
- 本品茎横切面：表皮细胞1列，扁平，外壁及侧壁稍增厚，微木化，外被黄色或橘黄色角质层，有的外层可见无色的薄壁细胞组成的叶鞘层。基本薄壁组织细胞多角形，大小相似，其间散在9～47个维管束，近维管束处薄壁细胞较小，维管束为有限外韧型，维管束鞘纤维群呈单帽状，偶呈双帽状，纤维1～2列，外侧纤维直径通常小于内侧纤维，有的外侧小型薄壁细胞中含有硅质块。草酸钙针晶束多见于近表皮处薄壁细胞或近表皮处维管束旁的薄壁细胞中。薄壁细胞中含有淀粉粒。
本品粉末淡黄色至黄绿色。表皮细胞无色或淡黄色，表面观呈长多角形或类多角形，垂周壁连珠状增厚。束鞘纤维成束或离散，长梭形或细长，壁较厚，纹孔稀少，有时可见纤维束周围细胞含类圆形硅质块。木纤维细长，多成束，壁稍厚。网纹导管、梯纹导管或具缘纹孔导管直径9～58μm。草酸钙针晶成束或散在。 - 取本品粉末（过二号筛）1g，加无水甲醇20ml，超声处理30分钟，滤过，滤液蒸干，残渣加水15使溶解，用石油醚（60～90℃）洗涤2次，每次20ml，弃去石油醚液，水液用乙酸乙酯洗涤2次，每次20ml，弃去乙酸乙酯液，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20ml，合并正丁醇液，蒸干，残渣加无水甲醇1ml使溶解，作为供试品溶液。另取霍山石斛对照药材1g,同法制成对照药材溶液。吸取上述两种溶液各3～5μl分别点于同一聚酰胺薄膜上，以乙醇一丁酮一乙酰丙酮一水（4∶4∶1∶17）为展开剂，展开（20℃以下），取出，晾干，在105℃烘干，取出，喷以5％三氯化铝乙醇溶液，在105℃加热约3分钟，取出，置紫外光灯（365nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。
- 聚合酶链式反应一限制性内切酶长度多态性方法。
- 模板DNA提取：取本品0.1g，置乳钵中研磨成极细粉。取25mg，置1.5ml离心管中，加人CTAB沉淀液1000μl，涡旋震荡，65℃水浴加热20分钟（中间震荡混匀3次），离心（转速为每分钟12000转）10分钟；弃去上清液，加人1000μl CTAB沉淀液，涡旋震荡，65℃水浴加热10分钟，离心（转速为每分钟12000转）10分钟；弃去上清液，加人CTAB提取液900μl、蛋白酶K（20mg/ml）5μl充分震荡混匀，65℃水浴加热30分钟，离心（转速为每分钟12000转）10分钟，吸取上清液于新的2．0ml离心管中；加人900μl三氯甲烷一异戊醇（体积比24∶1)溶液，充分震荡混匀，离心（转速为每分钟12000转）10分钟；取上清液，加人等体积三氯甲烷一异戊醇（体积比24∶1)溶液（约800μl)，充分震荡混匀，离心（转速为每分钟12000转）10分钟；取上清液（分三层，取最上层，约750μl)于新的2.0ml离心管中，加人2/3体积的异丙醇，于一20℃放置30分钟；离心（转速为每分钟12000转）10分钟，弃去上清液；沉淀用500μl的70％乙醇震荡1分钟，离心（转速为每分钟12000转)3分钟；弃去上清液，37℃水浴锅中开盖挥干乙醇；加人50无菌超纯水，溶解DNA样本，作为供试品溶液，置4℃冰箱中备用。另取霍山石斛对照药材0.1g，同法制成对照药材模板DNA溶液。
PCR-RFLP反应 - 鉴别引物：5'AECITCATCAAGTITAGTGCATPC 3'和5' AGAGCTGATGGGCCITTGA3'。PCR反应体系：在200μl离心管中进行，反应总体积为25μl反应体系包括10×PCR缓冲液2.5μl，dNTP（10mmol/L）1μl，鉴别引物（50μmol/L)各0.2μl，高保真TaqDAN聚合酶（5U/μl)0.2μl，10mg/ml BSA1μl，25％PVP 1μl，模板1μl无菌超纯水18.4μl。将离心管置PCR仪，反应参数：95℃预变性5分钟，循环反应40次（95℃10秒，56℃20秒，72℃20秒），72℃延伸5分钟。取R反应液，置200离心管中，进行酶切反应，反应总体积为20μl，反应体系包括10×酶切缓冲液2μl，PCR反应液17.5μl，AluI（10U/μl)0.5μl，酶切反应在37℃水浴反应30分钟。另取无菌超纯水，同法上述PCR-RFLP反应操作，作为空白对照。 - 电泳检测：照琼脂糖凝胶电泳法（《中国药典》2015年版四部 通则0541），胶浓度为1.5％，胶中加人核酸凝胶色剂GelRed；供试品与对照药材酶切反应产物的上样量分别为8μl，DNA分子量标记上样量为2μl（0.5μg/μl）。电泳结束后，取凝胶片在凝胶成像仪上或紫外透射仪上检视。霍山石斛供试品凝胶电泳图谱中，在与对照药材凝胶电泳图谱相应位置上，在100～200bp间应有单一DNA条带，且PCR产物与酶切产物条带位置一致。其他石斛供试品凝胶电泳图谱中，在与对照药材凝胶电泳图谱相应位置上，PCR产物在100～200bp间应有单一DNA条带，而酶切产物在100～200bp、100bp以下各有1条带，空白对照无条带。
霍山石斛的检查
- 水分：霍山石斛干条和霍山石斛枫斗均不得过12.0％（《中国药典》2015年版四部 通则0832第二法）。
- 总灰分：霍山石斛干条和霍山石斛枫斗均不得过8.0％（《中国药典》2015年版四部 通则2302）。
霍山石斛的浸出物
照醇溶性浸出物测定法（《中国药典》2015年版四部 通则2201）项下的热浸法测定，用乙醇作溶剂，霍山石斛干条和霍山石斛枫斗均不得少于6.5％。
霍山石斛的含量测定
- 对照品溶液的制备：取住无水葡萄糖对照品适量，精密称定，加水溶解，制成每1ml含100μg的溶液，即得。
- 标准曲线的制备：精密量取对照品溶液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml，分别置10ml具塞试管中，各加水补至1.0ml，精密加人5％苯酚溶液1ml（临用配制），摇匀，再精密加硫酸5ml，摇匀，置沸水浴中加热20分钟，取出，置冰浴中冷却5分钟，以相应试剂为空白，照紫外一可见分光光度法（《中国药典》2015年版四部 通则0401），在488nm波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。
- 供试品溶液制备：取样品粉末（过3号筛）约0.4g，精密称定，加水200ml，加热回流2小时，放冷，转移至250ml量瓶中，用少量水分次洗涤容器，洗液并人同一量瓶中，加水至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml，置15ml离心管中，精密加人无水乙醇10ml，摇匀，冷藏1小时，取出，离心（转速为每分钟4000转）20分钟，弃去上清液，沉淀加80％乙醇洗涤2次，每次8ml，离心，弃去上清液，沉淀加热水溶解，转移至25ml量瓶中，放至室温，加水至刻度，摇匀，即得。
- 测定法：精密量取供试品溶液1ml，置10ml具塞试管中，照标准曲线制备项下的方法，自“精密加人5％苯酚溶液1”起依法测定吸光度，从标准曲线上读出供试品溶液中住无水葡萄糖的量，计算，即得。本品按干燥品计算，含霍山石斛多糖以D-无水葡萄糖（C6H12O6）计，霍山石斛干条和霍山石斛枫斗均不得少于17.0％。
霍山石斛的性味与归经
甘，性平。归肾、胃经。
霍山石斛的功能与主治
益胃生津，滋阴清热。用于阴伤津亏，口干烦渴，食少干呕，病后虚热，目暗不明。
霍山石斛的用法与用量
- 鲜霍山石斛：15～30g，
- 霍山石斛干条、霍山石斛枫斗：6～12g。
霍山石斛的处方应付
写鲜霍山石斛、鲜米斛均付鲜霍山石斛，写霍山石斛干条、米斛干条均付霍山石斛干条，写霍山石斛枫斗、米斛枫斗均付霍山石斛枫斗。
霍山石斛的贮藏
置阴凉、干燥处。鲜霍山石斛置阴凉、干燥、通风处保存。
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